大腸桿菌表達(dá)外源蛋白,在超聲破碎的時(shí)候用超聲波破碎儀便能起到很好的效果,對其他的一些細(xì)菌同樣起作用,比如鏈霉菌,下面來詳細(xì)的了解一下吧。
細(xì)菌沉淀直接加樣品進(jìn)行混勻、離心、煮沸后直接上樣,染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱,將染色液換成大量的水在微波爐煮就可以了。在表達(dá)重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞,采用冰浴 ,但是不一會就會產(chǎn)生大量泡沫,影響了破碎功率。
在實(shí)驗(yàn)過程中若產(chǎn)生氣泡是因?yàn)樘筋^位置沒有放好,探頭一定要接近底部,約1cm。功率根據(jù)儀器不同也會有所不同,因此可以觀察液面,注意有波動但不要太劇烈機(jī)好。變幅桿位置擺放也要注意,聽聲音如果不對的話就要及時(shí)調(diào)整,另外可以從菌濃度方面考慮。在破碎時(shí)試著加大體積,強(qiáng)度不要超過60%。
嘗試超8秒,對有些菌體蛋白來說,很難散熱,導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,因此停留的時(shí)間要稍長一點(diǎn),這種情況多見于包涵體形式的蛋白。
使用超聲波破碎儀在做大腸柑橘超聲時(shí),采用400W,超5停5的方法,效果不錯,但是用在鏈霉菌上,似乎沒有什么效果,可能死由于細(xì)胞壁組成差異造成的,因?yàn)榇竽c桿菌屬于革蘭氏陰性菌的。
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