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技術(shù)知識(shí)

超聲波細(xì)胞破碎儀|脫鈣機(jī)老鼠骨骼組織脫鈣做免疫組化實(shí)驗(yàn)

來源:上海凈信     發(fā)布時(shí)間:2022-07-11    作者:上海凈信

  一,骨組織切片及trap染色實(shí)驗(yàn)步驟:

  1、骨組織脫鈣要求:新鮮骨組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出置于EDTA脫鈣液內(nèi)脫鈣(不能用含酸的脫鈣液脫鈣),每3天換一次脫鈣液,至骨組織針扎可以順利通過為止。

  2、取材:在通風(fēng)櫥內(nèi)用手術(shù)刀將目的部位組織修平整,將修切好的組織和對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽放于脫水盒

  3、脫水:將脫水盒放進(jìn)吊籃里于脫水機(jī)內(nèi)依次梯度酒精進(jìn)行脫水。75%酒精4h-85%酒精 2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I5-10min-二甲苯II 5-10min-蠟I 1h-蠟II 1h-蠟iii 1h

  4、包埋:將浸好蠟的組織于包埋機(jī)內(nèi)進(jìn)行包埋。先將融化的蠟放入包埋框,待蠟?zāi)讨皩⒔M織從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽。于-20°凍臺(tái)冷卻,蠟?zāi)毯髮⑾瀴K從包埋框中取出并修整蠟塊。

  二,傳統(tǒng)方法

  1.將骨標(biāo)本置于盛有脫鈣液的容器中放入小型臺(tái)搖床上(搖床振蕩為了更好的是脫鈣液和骨標(biāo)本充分接觸),每天更換一次脫鈣液。

  2.傳統(tǒng)方法實(shí)物圖

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  三,小美超聲脫鈣儀脫鈣

  1.產(chǎn)品介紹:小美超聲XM-202A超聲脫鈣儀是一款能使骨標(biāo)本快速脫去鈣質(zhì)的方法,采用獨(dú)特脫鈣液配方在超聲波引導(dǎo)下,實(shí)現(xiàn)快速而又安全地將磷酸鈣、磷酸鎂、碳酸鈣等晶體分子解體,在微波加速下完成 脫鈣、固定與中性緩沖過程,同時(shí)100%保存組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和樣本的抗原特性,有利于后續(xù)進(jìn)行的抗原修復(fù)處理。整個(gè)過程具有定時(shí)控溫滿足不同實(shí)驗(yàn)要求。

  2.實(shí)驗(yàn)步驟:將骨標(biāo)本置于盛有脫鈣液的容器中放入脫鈣機(jī)(注意脫鈣儀水槽中的水位要高于骨標(biāo)本脫鈣液的水位。)設(shè)好時(shí)間360h(15天),溫度37℃。

  3.實(shí)驗(yàn)實(shí)物圖:

1657520783281969.png

  4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:將超聲15天的骨標(biāo)本切片后能滿意染色,組織無皺縮或腫脹等偽跡,保證制作成切片后的優(yōu)片率達(dá)95%以上,非常有利于后續(xù)的組織學(xué)處理,尤其是免疫組化染色,甚至滿足后續(xù)DNA檢測(cè)項(xiàng)目。

  四,傳統(tǒng)方法(超聲波細(xì)胞破碎儀)和超聲脫鈣方法對(duì)比

  1.節(jié)省脫鈣時(shí)間:使用快速脫鈣液骨髓穿刺、耳鼻軟骨組織脫鈣時(shí)間比常規(guī)脫鈣節(jié)省75%;對(duì)高密度的骨皮質(zhì)脫鈣時(shí)間比傳統(tǒng)方法縮短40%至60%。

  2.樣品溫控:37℃(溫度可調(diào)).可避免或緩解因組織與脫鈣液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生的升溫;超過攝氏50度時(shí),還會(huì)破壞或改變骨標(biāo)本的顯微組織形態(tài),影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

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